核心概念:什么是CUE?
微生物碳利用效率(Carbon Use Efficiency, CUE) 是指微生物將吸收的碳(C)轉(zhuǎn)化為自身生物量(Growth)的比例,
而不是通過呼吸(Respiration)釋放回大氣中的比例。
基于1?O-H?O(氧-18標(biāo)記水)摻入DNA的方法
這是一個目前非常前沿和先進的技術(shù),用于測量整個微生物群落的總碳利用效率,而不是針對某一種特定外源添加物(如葡萄糖)的利用效率。
方法原理詳解:
標(biāo)記:向土壤樣品中添加1?O標(biāo)記的水(H?1?O)。微生物在生長繁殖、合成新DNA的過程中,會利用水環(huán)境中的氧原子。
摻入:1?O原子會被摻入到新合成的DNA鏈的磷酸基團中。微生物生長越快,合成的新DNA越多,摻入的1?O就越多。
提取與測量:培養(yǎng)結(jié)束后,提取土壤中所有微生物的總DNA。使用分子技術(shù)(如下一代測序)可以測量DNA中1?O的富集程度,從而計算出微生物的總生長速率。
關(guān)聯(lián)計算:同時,在培養(yǎng)期間測量土壤的基礎(chǔ)呼吸速率(釋放CO?的速率)。將測得的生長速率與呼吸速率相結(jié)合,通過模型計算出整個微生物群落的平均CUE。
計算公式可以簡化為:CUE = 生長速率 / (生長速率 + 呼吸速率)
土壤微生物碳利用效率(CUE)檢測,我們?yōu)槟贫ǖ膶嶒灧桨甘悄壳皣H上較為先進的基于1?O-DNA穩(wěn)定同位素探針技術(shù)。
該方法的核心原理是:
我們將向土壤樣品中添加無害的氧-18(1?O)標(biāo)記水。微生物在生長過程中會將其摻入到新合成的DNA中。通過精密測量DNA中1?O的富集程度,我們可以精確計算出微生物群落的總生長速率。同時,我們會監(jiān)測培養(yǎng)過程中土壤的二氧化碳釋放速率(呼吸速率)。最終,通過生長與呼吸速率的比值,計算出能反映土壤微生物群落整體代謝狀態(tài)的碳利用效率(CUE)。
該方法的優(yōu)勢在于:
更接近真實情況:它測量的是微生物對土壤中原有總有機碳的利用效率,而不是對單一外源添加物(如葡萄糖)的響應(yīng),結(jié)果更能代表土壤真實的碳循環(huán)過程。
避免了添加底物的干擾:無需添加高濃度的糖類等底物,避免了因“糖沖擊”而可能帶來的測量偏差。
高通量且信息豐富:提取出的DNA后續(xù)還可用于微生物群落結(jié)構(gòu)分析,能更全面地 linking 碳循環(huán)功能與微生物種類。
檢測的成本主要構(gòu)成如下:
核心同位素試劑(H?1?O)
土壤基因組DNA提取試劑盒
實驗操作及分析人工成本
其他耗材與試劑